三得醫(yī)學(xué)小編為你簡單介紹幾種尿沉渣的檢驗方法。
一、尿沉渣手工制片鏡檢
直接鏡檢法
將尿液充分混勻，取其中1滴尿直接涂于載玻片上，依據(jù)各種有形成分的形態(tài)特點，用顯微鏡觀察作出報告。
玻片畫框法
用標(biāo)定好的滴管加混勻尿2滴涂滿蠟筆畫好的25.2 mm×25.2 mm框內(nèi)，靜止3 min后累計20個高倍視野細(xì)胞數(shù)，結(jié)果以每微升細(xì)胞數(shù)報告。細(xì)胞數(shù)/μl=T×1/20×A/B×1/V。式中T=細(xì)胞累計數(shù)，20=所觀察的視野數(shù)，A=標(biāo)本分布面積，B=高倍視野面積=(高倍視野直徑/2)2.π，V=標(biāo)本用量(μl)，高倍視野直徑=目鏡中光欄直徑/目鏡放大倍數(shù)，光欄直徑可用千分尺測出。
自然沉降法
將尿液在室溫下放置一定時間(15 min～30 min)后，移去上層的尿液，保留底層大約0.2 mL左右，然后混勻，取其中1滴沉淀于載玻片上，鏡檢同直接鏡檢法。
離心沉淀法
尿液10 ml離心5 min，相對離心力(RCF)為400，棄上清留沉渣尿量0.2 ml混勻，吸取20 μl，滴在玻片上用18 mm×18 mm蓋片覆蓋，先用10×10低倍鏡觀察全片，再用10×40高倍鏡仔細(xì)觀察，檢查細(xì)胞至少10個視野，檢查管型至少20個低倍視野，報告以高倍視野所見最低至最高數(shù)字表示。建議國內(nèi)逐步以每微升細(xì)胞數(shù)報告。
染色法
包括濕潤染色法及特定成分染色法。
相差顯微鏡法
相差顯微鏡又稱相襯顯微鏡，是以光的衍射和干涉現(xiàn)象照射標(biāo)本，產(chǎn)生明暗不同的反差識別，有助于增強(qiáng)透明與半透明的有形成分的輪廓，尤其是透明管型、不典型紅細(xì)胞、血小板的辨別。
干涉顯微鏡法
在不同位相時，當(dāng)兩種相同顏色的光波相遇時，其亮度發(fā)生增強(qiáng)或減弱的變化，從而提高物體的清晰度，可觀察到細(xì)胞或管型的三維空間結(jié)構(gòu)。
偏振光顯微鏡法 利用光的偏振特性對光有雙折射性的物體進(jìn)行鑒別，可觀察活細(xì)胞的內(nèi)含物、神經(jīng)纖維、植物纖維的結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)和動物肌肉纖維等?？煞治鲎冃赃^程，觀察到細(xì)胞的死活：正常細(xì)胞對光偏振呈左旋，腫瘤細(xì)胞多數(shù)呈右旋，可顯示鹽類結(jié)晶在自然光下見不到的精細(xì)結(jié)構(gòu)。
透射電鏡法
利用電子束作為“照明波源”可明顯提高分辨率，將尿沉渣標(biāo)本切成超薄片在電子顯微鏡下觀察，可準(zhǔn)確分辨出細(xì)菌管型、白色念珠菌管型、血小板管型、粗顆粒管型和細(xì)顆粒管型等。
二、尿沉渣定量計數(shù)板法
取一定量(10 ml)尿液置特制的離心管內(nèi)，在規(guī)定離心時間和轉(zhuǎn)速的條件下離心沉淀，移去上清尿液，保留一定量的尿沉淀物，取1滴滴人計數(shù)板內(nèi)，在顯微鏡下計數(shù)，然后換算成一定體積(1/μl)內(nèi)尿有形成分的含量。
Li?Ucc型尿沉渣計數(shù)板[5] 計算室為正方形邊長9 mm，池深0.125 mm，混勻尿滴入池內(nèi)計數(shù)規(guī)定區(qū)結(jié)果除以5，細(xì)胞少時計數(shù)全室結(jié)果除以10，即為每微升細(xì)胞數(shù)。
牛鮑計數(shù)板法 將混勻尿充池，計數(shù)9大格細(xì)胞數(shù)×10÷9，即為每微升細(xì)胞數(shù)。
FR定量板法[6] 混勻尿10 ml于Biostd離心管內(nèi)，經(jīng)1 500 r/min 離心5 min，傾去上清余0.25 ml沉渣即留在管底縮小區(qū)內(nèi)，將沉渣混勻滴入FR板內(nèi)，計數(shù)10大格即得每微升細(xì)胞數(shù)。每板10人份一次性使用，保濕，細(xì)胞形態(tài)及分布穩(wěn)定。
三、干化學(xué)法
將試劑包含在纖維素中作為反應(yīng)部分粘附在塑料支持片上干燥而成試紙帶，以鏡檢為標(biāo)準(zhǔn)半定量檢測尿中成分。Schumann認(rèn)為干化學(xué)檢查陰性再鏡檢是浪費時間，周仲玲等認(rèn)為即使干化學(xué)檢查全部陰性，而滴蟲、霉菌及病理性結(jié)晶等仍需鏡檢。1996年的推薦方法中確定，干化學(xué)檢驗只有符合下列四項要求才可以不作鏡檢:尿白細(xì)胞結(jié)果為陰性；紅細(xì)胞結(jié)果陰性；尿蛋白為陰性；亞硝酸鹽為陰性。來源于腎科標(biāo)本不適合干化學(xué)篩選，應(yīng)一律顯微鏡檢查。叢玉隆等6 349例研究結(jié)果:干化學(xué)分析結(jié)果同時存在紅細(xì)胞陰性、白細(xì)胞陰性、蛋白質(zhì)陰性時免于鏡檢對病理性管型檢出率影響不大。
四、尿沉渣自動化影像分析
尿沉渣分析自動化的研究由來己久，但難度較大。直到1986年才由美國國際遙控攝像系統(tǒng)有限公司研制生產(chǎn)了世界上第一臺高速攝像機(jī)式的尿沉渣自動分析儀。
目前，尿沉渣分析儀主要有兩大類:基于尿沉渣鏡檢影像分析原理；基于尿沉渣流式細(xì)胞術(shù)和電阻抗檢測原理。
影像式尿沉渣(或稱“工作站”)其檢測原理與人工顯微鏡檢查原理基本相似，都是直觀地觀察有形成分的形態(tài)，但它須經(jīng)過嚴(yán)格的定時、定速離心，而后留取定量的尿沉渣，由配套動力裝置將其轉(zhuǎn)移至顯微鏡載物臺上刻有標(biāo)尺的流動樣品池內(nèi)，通過頻閃光源燈、相聚光鏡、彩色攝像機(jī)等，在電腦顯示屏上得到清晰的尿沉渣畫面，再由操作者在屏幕上統(tǒng)計出各種有形成分的數(shù)目，由計算機(jī)自動換算成每微升單位的數(shù)據(jù)。同普通光學(xué)顯微鏡方法相比，其分析標(biāo)準(zhǔn)定量、視野清晰、速度快捷、準(zhǔn)確度高。
1983年，美國國際遙控影像系統(tǒng)有限公司（International Remote imaging systems Co,Ltd）研制生產(chǎn)了世界上第一臺“Yollow IRlS”高速攝影機(jī)式的尿沉渣自動分析儀，簡稱Y—1尿自動分析儀。這種儀器是將標(biāo)本的粒子影像展示在計算機(jī)的屏幕上，由檢驗人員加以鑒別。
1996年，德國寶靈曼推出圖像式尿沉渣自動分析儀，采用兩個快速|(zhì)檢驗地帶網(wǎng)|移動的CCD攝像頭對樣品計數(shù)池進(jìn)行掃描。
1997年，美國戴西斯公司（DiaSys R/S Corporation）推出流動池式尿沉渣定量分析工作站，1999年引入中國，由于解決了尿沉渣鏡檢中精確定量問題，該產(chǎn)品引起了國內(nèi)檢驗界的關(guān)注。
五、尿沉渣自動化流式分析
1995年，Sysmex研制出經(jīng)典機(jī)型 UF-100，被譽(yù)為"尿分析史的革命"。UF-100每小時可分析約100個樣本，大大提高了提高了實驗室的自動化水平和工作效率。
在UF-100全自動尿沉渣分析檢測分析中，應(yīng)用流式細(xì)胞和電阻抗分析的原理:尿液中細(xì)胞等經(jīng)熒光色素染色后，在鞘流液的作用下，形成單個、縱列細(xì)胞流，通過氬激光檢測區(qū)，儀器檢測熒光、散射光和電阻抗的變化；當(dāng)儀器在捕獲了熒光強(qiáng)度Fl、前向熒光脈沖寬度Flw、前向散射光強(qiáng)度Fsc、前向散射光脈沖寬度Fscw、電阻抗信號后，綜合識別和計算得到了相應(yīng)細(xì)胞的大小、長度、體積和染色質(zhì)長度等資料，并做出紅細(xì)胞、白細(xì)胞、細(xì)菌、管型等的散射圖及定量報告。
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